繁殖技术这一专题知识体系庞大 ，但都有规律可循（但我有点犯懒 ，www，毕竟字字手打真的很费神费力 。

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1.1观看各种动物人工授精、胚胎移植等繁殖技术录像
时间：2023.5.13
地点：青岛农业大学生物楼C123动物繁殖学实验室
观看内容：马、驴、牛、羊、禽的发情鉴定、直肠检查、胚胎移植、人工授精、妊娠诊断的主要方法和技术手段，为第二周周末两天的实操训练打好理论基础。

1.2马、驴、牛发情鉴定理论讲解及实操训练
1.2.1理论讲解
在正常情况下，母马的发情周期平均21天，发情持续期3-7天。

马和驴都是季节性多次发情，驴比马发情时间稍早，一般在早春发情，而母马则在晚春开始发情。

在马、驴、牛的繁殖工作中，发情鉴定是一个重要的技术环节，通过发情鉴定可以判断发情是否正常，以及发情阶段，确定配种时间，提高受胎率。

常用外部观察法、试情法检测，除此之外还有如下方法。

外部表现法
母马、驴、牛在发情时，其外阴会出现肿胀，潮红出血，尾巴高举，闪露外阴，坐立不安，阴唇部常常会出现皱纹，在发情初期伸展。

阴道黏膜呈潮红色，细润而有光泽，有类似鸡蛋清粘液流出。

牛在发情时会出现“压背反射”。

根据其是否接受爬跨，接受爬跨12小时后，此时其不再爬跨其它牛，其阴唇又会开始出现皱纹，阴道黏膜颜色变浅。

配种时间选择在发情末期即可开始。

这种方法优点是
很直观
，但是也有
缺点
存在，需要一直观察，每次约需要20分钟，
劳动力消耗量大
。

此外，母驴在发情时还会出现耳朵、尾巴高举，外阴肿胀，频频排尿现象。

母马会表现出兴奋，出现嘶鸣。

母马、驴的发情持续期约为7天左右，因此很难确定其配种时间。

牛的发情持续期一般不会超过24小时。

此外，有时还会出现异常发情的情况，例如假发情、不发情、孕期发情、断续发情、慕雄狂等。

直肠检查法
此法检查时要有步骤的进行，能够比较准确的判断卵泡的发育程度，因此判定配种时期也较准确，必要时也可顺便进行妊娠诊断，以免将孕畜配种因而发生流产。

但是采用此法时，术者须经多次实践，积累比较丰富经验，方能正确掌握。

阴道检查法
应用阴道开张器插入马、驴、牛阴道，检查其阴道黏膜的颜色、润滑度、子宫颈的颜色、肿胀度及开口的大小和粘液的数量、颜色和粘度等，以便判断发情的程度。

检查时，开张器要消毒以防感染，插入时要小心谨慎，以免损伤阴道壁。

发情母牛阴道黏膜充血潮红，表面光滑湿润；子宫颈外口充血、松弛、柔软开张，排出大量透明的牵缕性黏液，如玻棒状，不易折断。

黏液最初稀薄，随着发惰时间的推移，逐渐变稠，量也由少变多。

到发情后期，量逐渐减少且黏性差，颜色不透明，有时含淡黄色细胞碎屑或微量血液。

不发情的母牛阴道苍白、千燥，子宫颈口紧闭，所以无黏液流出。

黏液的流动性取决于酸碱度，碱性越大越黏，乏情期的阴道黏液比发情期的碱性强，故黏性大。

发情开始时，黏液碱性较低，故黏性最小；发情旺期，黏液碱性增高，故黏性最强，有牵缕性，可以拉长。

母牛阴道壁上的黏液比取出的黏液略酸，如发情时的黏液，在阴道内测定为pH6.57，而取出在试管内测定时则为pH7.45。

子宫颈的黏液一般比阴道的稍微酸些。

发情母牛的子宫颈黏液如在载玻片上涂片、干燥后镜检，则出现羊齿植物状的结晶花纹。

结晶花纹晶型，排列长而整齐，保持时间达数小时以上，其他杂物如上皮细胞、白细胞等很少。

如果结晶结构较短，呈短金藻或星芒状，且保持时间较短，白细胞较多，这是发情末期的表现。

据报道，亦有少数母牛的子宫颈黏液涂片不呈结晶状态。

计步器法
通过使用计步器测量动物的活动，比如安装在被监控动物的腿上或者脖子上，是另外的一种发情鉴定自动检测方法。

通过计步器所获得的有关动物活动能力的信息，可以作为动物发情的辅助标志，这是基于发情动物的身体运动量要显著高于未发情动物的原理。

当计步器进入房内，与安装在距离计步器大约40厘米的天线互通信息后，通过计步器所获得的信息就被自动下载到电脑中。

当根据活动量解释发情信息时，以往的发情活动规律是十分有用的。

尾根涂腊法
许多商业化的奶牛场采取一种经济的尾部标记法来帮助进行发情鉴定。

用粉笔给待配牛舍中所有动物的尾根涂上颜色，每天1次。

动物在爬跨那些安静站立发情动物时，就会将他们尾根处的粉笔擦掉。

尾部涂料也可以用来实现这种方法，但是这种方法在诊断那些发情活力不高的动物时效果不好。

如果选择了这种方法，我们只需观察检查标记周围的毛发，确定粉笔印迹是被爬跨时抹去的还是被舔掉的，并注意检查被爬跨母牛尾根处毛发的特征性变化就可以。

激素测定法
母马、驴、牛体内孕激素水平可以用来评估发情鉴定的准确度。

血液黄体酮水平检测，是对血液中实际的黄体酮含量进行检测，而乳汁黄体酮含量则是通过一个颜色反应来表明其黄体酮水平。

血液黄体酮水平检测可以通过实验室临床检测来获得，而乳汁黄体酮检测可以通过检测试剂盒在农场中进行。

在发情期即将到来之前，以及发情期间和发情刚刚结束时，黄体酮处于一个较低水平。

孕酮水平较低并不一定意味着动物发情。

因此，乳汁黄体酮检测应该是作为一种辅助手段，并不能取代对动物实际地观察。

通过以上几种牛发情鉴定的辅助方法，我们就可以从发情时的外部特征和内部特征进行综合的分析，获得准确的判断，从而适时配种，提高牛的受胎率判断。

此方法简单，便于操作。

B超诊断法
此时卵泡直径为3.5厘米，卵泡壁光滑，无毛糙。

电阻值法
发情粘液电阻值较低，约200欧姆，雌激素作用下离子会消失。

牛不发情时其电阻值在450欧姆以上，发情末期在430欧姆。

阴道粘液PH测定法
不发情时，阴道粘液偏酸性，约6.0-7.0，而经产牛的阴道粘液PH约为6.7-6.8。

此外还有
试情布法、仿生学法
和
公羊瓶法
等。

1.2.2实操训练
实操前的器材准备工作，主要用到阴道开张器，75%酒精，绳索，手电筒、B超、PE手套、新结尔灭等。

本次训练以母驴为操作对象。

在发情鉴定开始前，首先要将母驴进行
保定
。

本次使用六柱栏保定。

保定时需要的打结方式有单环结、双环结、猪蹄扣等。

本次以
阴道检查法
为实例，进行母驴的发情鉴定。

阴道检查的操作：外阴郁先用清水洗净后，再用1%煤酚皂或0.1%新洁尔灭溶液进行消毒，最后用消毒纱布或酒精棉球擦干。

开膣器清洗擦干后，先用75%的酒精棉球消毒其内外面，然后用火焰烧灼消毒，涂上灭菌过的润滑剂。

用左手拇指和食指将阴唇分开，以右手持开膣器把柄，使闭合的开膣器和阴门相适应，斜向前上方插入阴门。

当开膣器的前1/3进入阴门后，即改成水平方向插入阴道，同时于转打开开张器，使其把柄向下，通过反光镜或手电筒光线检查阴道变化。

应特别注意阴道黏膜的色泽及湿润程度，于宫颈部的颜色及形状，黏液的量、黏度和气味，以及子宫颈管是否开张和开张程度。

检查完后稍微合拢开膣器，抽出。

注意消毒要严密，操作要仔细，防止粗暴。

在手电筒光线下，可看到母驴子宫颈开口紧闭，且无粘液流出，故该母驴未发情。

本次阴道检查后，发现母驴未发情，且其阴道内有较多息肉存在，很有可能导致母驴发情异常的原因。

1.3马、驴、牛直肠检查理论讲解及实操训练
1.3.1理论讲解
要对母畜进行发情鉴定或妊娠诊断，直肠检查是必不可少的步骤。

直肠检查法进行发情鉴定是将操作人员的手臂伸进母畜的直肠内，隔着直肠壁触诊卵巢上卵泡发育情况，以便确定适宜的配种时期。

其优点是通过触摸卵泡状态，可以判断排卵时间。

直肠检查时要注意卵泡与黄体的区别。

卵泡有光滑、较硬的感觉。

卵泡与卵巢连接处光滑，无界线，呈半球状突出于卵巢表面，而没有退化的黄体在卵巢上一般呈扁圆形条状突起。

此外，卵泡发育是进行性的，由小到大，由硬到软，由无波动到有波动，由无弹性到有弹性。

没有妊娠时，黄体则发生退行性变化，发育时较大，较软，到退化时期愈来愈小，愈来愈硬。

直肠检查法的操作步骤如下：
检查者穿好工作服，衣袖挽起，带长臂手套。

检查时，宜站在牛的正后方，五指并拢成锥形，缓慢捻转伸入肛门，进入直肠，掏出粪便后，掌心向下，按压抚摸，在骨盆腔底部，即可摸到一个长形、质地较硬的棒状物——子宫颈，再向前下方可摸到角间沟。

角间沟的两旁为向前下方弯曲的两侧子宫角，沿着子宫角大弯下外侧可摸到卵巢，用手指检查其形状、大小，以及卵巢上卵泡的发育情况，判断母牛是否发情。

一般情况下，发情母牛子宫颈稍大而软，子宫黏膜水肿，子宫角坚实、体积增大，子宫收缩反应比较明显。

不发情的母牛，子宫颈细而硬，子宫较松弛，收缩反应差。

发情母牛卵巢中的卵泡表面突出，圆而光滑，触摸时略有波动。

卵泡直径发育初期约1.5厘米，发育最大时可达2.5厘米。

在排卵前6~12小时，卵泡质地柔软，波动明显。

排卵后，原卵泡处有不光滑的小凹陷，此后将形成黄体。

1.3.2实操训练
以母驴为操作对象，并将其保定后，按上述方法进行直肠检查。

直肠检查后发现，该母驴卵巢上卵泡发育不突出，处于发情前期。

1.4马、驴、牛胚胎移植理论讲解及实操训练
1.4.1理论讲解
胚胎移植也叫受精卵移植，是将优良遗传性状的母牛和公牛交配后的早期胚胎取出，移植到另一头生理状态相同的母牛子宫内，使其继续发育直到分娩。

提供胚胎的母牛称为供体，接受胚胎的母牛称为受体。

胚胎移植技术主要包括供体母畜的选择及饲养管理，超数排卵，人工授精，胚胎采集和质量鉴定，受体的选择及饲养管理，受体的同期发情和胚胎移植等环节。

该技术是充分发挥了优秀母畜的遗传和繁殖潜力，大大增加了优秀母畜的群体数量。

供体母畜要有较高的生产性能，品种特征明显，体型外貌良好，遗传性能稳定等优点。

受体母畜要求体格大，膘情中等。

超排药品主要有促卵泡素、氯前列烯醇或阴道栓等。

超排过程中供体母牛在发情后的第9~13天，连续4天早晚间隔12小时肌肉注射FSH，在注射FSH的第3天用PG处理。

之后进行冲胚操作。

冲胚时间：在发情配种后的第7天冲胚，也可在第6天或第8天冲胚。

保定与麻醉：供体牛按照人上授精的要求进行保定，并用2%的普鲁卡因5-10毫升作尾椎硬膜外麻醉。

器械和冲胚液的准备：所有器械必须严格按无菌要求进行消毒，在清洗的最后一定要用双蒸水冲洗，接触胚胎的器械容器要用冲卵液进行冲洗；冲胚前冲卵液要先预热到35-37℃。

超排效果检查：在冲胚前，通过直肠检查卵巢黄体个数，可判断能冲出的胚胎个数。

冲胚的操作步骤：
①用清洁温水清洗外阴后，用消毒毛巾或卫生纸擦干净。

一般不用消毒药水，因其使用不当反而会对胚胎造成伤害。

②用扩张棒打开子宫颈通道后退出。

③用冲卵液内外冲洗冲卵管，并检查气球是否完好后装入钢芯。

④采用直肠把握法将冲卵管插入阴道，通过子宫颈将冲卵管插到一侧子宫角，当到达子宫角大弯部位时，将钢芯退出约3厘米，并把冲卵管继续向前推进，如此反复，直到冲卵管前端到达子宫角深部。

由助手用注射器冲卵管冲气孔注入9-18毫升空气使气球膨胀，堵住子宫角，关闭进气孔后，将通针取出开始冲胚。

⑤助手用注射器吸取冲卵液，每次15-30毫升，从冲卵管L]推入子宫角，注入冲卵液后术者用直肠中的手将子宫角抬高，冲卵液体就会同流，用瓶子接住或直接用注射器回收即可。

一般一侧子宫角反复冲7次左右。

⑥如需冲另一侧子宫角，则按③④⑤重复操作即可。

⑦冲胚时每头牛用一个容器装回收液，并要注意保温和避免污染。

冲出胚胎后需要进行检胚，合格后可采用活胚移植或者胚胎冷冻保存。

1.4.2实操训练
因该母驴未受精，故实操只进行了冲胚演示，冲胚需要的器材包括冲胚液、导管、胚胎过滤器、消毒液、无菌PE手套等。

1.5马、驴、牛人工授精理论讲解及实操训练
1.5.1理论讲解
人工授精是指利用器械采用公畜的精液，经过适当的检查和处理，再用器械把精液输送到母畜生殖道的适当部位，使之受孕的配种方法。

人工授精的意义在于其可以充分发挥优秀种公畜和配种效能，加快品种改良。

提高母畜的受胎率。

防止疾病特别是传染病的传播。

克服因家畜体型悬殊造成的配种困难。

冷冻精液的应用使种畜的利用不受空间和时间的限制。

是发展繁殖新技术的一项基础措施。

输精前的准备：
①母畜的准备：母畜经发情鉴定后，确定已到输精时间，将其适当保定，尾巴拉向一侧，清洗消毒外阴。

②器械准备：输精所用的器械应当彻底消毒，用稀释液冲洗后才可以使用。

③精液准备：液态保存的精液：轻轻震荡后升温至35℃，活力不低于0.6。

冷冻精液：输精人员应穿好防护服，指甲必须剪短磨光，戴上长臂手套。

输精时间的确定：母牛发情后9—24h输精两次，间隔8—12h。

细管冻精1支，0.5mL或0.25mL，有效精子不少于1000万。

人工授精的一般程序：
1.确定配种时间
对发情母牛适时配种，可以提高受胎率，因此要确定排卵时间和配种适宜时间。

决定母牛配种时间的因素有排卵时间、卵子保持受精能力的时间及精子在母牛生殖道内保持受精能力的时间。

母牛一般在发情结束后5~15小时排卵，在排卵后6~12小时保持受精能力，精子在母牛生殖道内保持受精能力的时间为24~48小时。

确定配种时间比较准确的方法是直肠检查法，但是大多数情况下依靠询问畜主母牛发情时间、观察母牛外阴部变化来确定最适宜的输精时间。

输精人员向畜主询问受配母牛年龄、胎次、发情等情况，仔细观察母牛表现：母牛神态转向安定，发情表现开始减弱，外阴部肿胀开始消失，子宫颈稍有收缩，黏膜由潮红变为粉红，直检时卵泡皮变溥，有弹力，卵泡液明显波动时，可输精。

2.解冻
将细管冻精从液氮罐中迅速取出,把封闭的一端置于38~39度的水杯中,水浴解冻10秒后取出，拭去水珠待用。

3.镜检
先将显微镜置于操作台或桌面上,对载玻片消毒后放到显微镜上,调好光。

将解冻好的细管封闭的一端剪去,剪口捏圆,挤一滴于载玻片上镜检精子活力。

冷冻精子的活力不得低于0.3。

4.装枪
将解冻的细管冻精装入输精枪,套上塑料外套管。

输精人员带上长臂手套。

5.消毒
将接受输精的母牛固定在六柱栏内保定好，尾巴固定于一侧，用0.1%的高锰酸钾溶液对外阴部彻底消毒,用卫生纸拭干外阴部。

6.输精
一般有阴道开张器输精法和直肠把握式输精法两种,目前常用的是直肠把握式输精法。

具体操作方法是：输精人员左手伸入直肠内，寻找并把子宫颈后端轻轻固定在手内，手臂向下按压，使阴门张开，右手持输精器，从阴门插入，先向上倾斜插入一段，避开尿道口，再平插至子宫颈口，然后两手配合，将输精器前端穿过子宫颈管中的皱壁轮，导入子宫颈深部，推动输精枪活塞，把精液注入子宫颈管中，然后抽出输精器。

这种方法的优点是精液可以注入子宫颈深部，受胎率可提高10~20%；对牛的刺激小，无痛感，特别适于处女牛使用；用具简单，操作安全方便。

输精时要轻插、适深、缓注、慢出，防止精液逆流。

输精结束后，要对输精器械消毒,进行有关登记，以便掌握怀孕天数和预计分娩日期。

1.5.2实操训练
1.6马、驴、牛妊娠诊断理论讲解及实操训练
1.6.1理论讲解
在实践生产中应用的妊娠诊断方法主要有外部观察法、直肠检查法、阴道检查法、孕酮水平测定法和超声波诊断法五种。

①外部观察法
外部观察法通常只作为一种辅助的诊断方法，妊娠母牛周期发情停止，性情变得温顺，食欲增强，被毛变得光亮，行动谨慎；到5个月后腹围明显增大，出现不对称，右侧腹壁突出；乳房逐渐发育，泌乳量明显下降，脉搏、呼吸次数明显增加；8个月右侧腹壁可见胎动，此方法在妊娠中后期观察比较准确，但不能在早期作出确切诊断。

②直肠检查法
直肠检查法是早期妊娠诊断最常用和最可靠的方法。

母牛妊娠21~24天，在孕角侧卵巢上，存在有发育良好、直径为2.5~3.0厘米的黄体；妊娠30天左右，两侧子宫角大小不对称，孕角及子宫体略微变粗，内有波动感，子宫壁变薄；妊娠2个月左右，孕角和子宫体变得更加粗大，两子宫角的大小明显不同。

孕角相当于空角的两倍左右，壁变得软、薄，而且波动感明显，角间沟变得宽平，子宫开始向腹腔下垂，但依然能摸到整个子宫；妊娠90天，角间的直径为12~16厘米，波动极明显，空角也增大一倍，角间沟消失，子宫开始沉向腹腔；妊娠4个月左右，子宫及胎儿已全部沉入腹腔，此时已摸不到子宫角，但可感觉到子宫动脉明显波动。

③阴道检查法
母牛妊娠20天左右，阴道黏膜变得苍白、无光泽，血管网不清晰，黏液量少而干燥，阴道收缩较紧。

妊娠3~4个月后，阴道黏液增多，变得较为混浊，颜色为灰黄或灰白色，多集中在子宫颈口附近，形成可以堵住子宫颈口的黏液塞。

但空怀母牛卵巢上有持久黄体时，也会有上述现象。

因此，阴道检查法的准确率也不是很高，只是一种辅助方法，不能作为主要的诊断方法。

④孕酮水平测定法
根据妊娠后血中及奶中孕酮含量明显增高的现象，用放射免疫和酶免疫法测定孕酮的含量，判断母牛是否妊娠，由于收集奶样比较方便，目前测定奶中孕酮含量的方法较为普遍。

⑤超声波诊断法
可根据超声波反射的波形进行判断。

利用超声波诊断时，可根据妊娠产生特殊的波形作为妊娠诊断的依据。

1.6.2实操训练
本次采用直肠检查法和超声波诊断法进行妊娠诊断。

操作步骤如上所述进行。

二、
主要收获
通过本次实习，我掌握了马、驴、牛等动物的繁殖技术相关的基本知识和基本技能，主要包括：马、驴、牛的人工授精技术操作、马、驴、牛人工授精的操作、马、驴、牛发情鉴定、马、驴、牛的妊娠诊断、马、驴、牛的胚胎移植操作练习等，实习中我能理论联系实际，加深对理论知识的理解和掌握，培养了我的创新能力和独立操作能力，更加了解本学科在畜牧生产中的作用和意义，并了解动物繁殖技术的新进展和未来发展方向。

三、
存在问题
3.1马和牛在发情鉴定上的区别有哪些？
3.2马和牛直肠检查操作时的注意事项？
四、
问题解答
通过查阅资料及问询指导老师，总结出了以下解决措施：
4.1马和牛在发情表现上的区别
1.母马为季节性多次发情性排卵动物,也称长日照发情动物,在早春后一直到夏季有多次发情周期循环,发情周期平均为21天，其发情持续期长,马平均为5—7天,驴平均为4—8天,卵泡发育大,规律性明显,卵泡发育到成熟排卵的时间较长。

怀孕母马卵巢上不仅有主黄体,还有副黄体,这是母马的另一特点。

与母马不同的是,母驴在发情时,上下颚频频开合发出吧嗒吧嗒的声音,生殖道分泌物也不如母马多,很少有母马的“吊线”现象。

2.牛属于全年多次周期发情。

在温暖季节里，发情周期正常，发情表现显著。

但是在寒冷地区，特别是粗放饲养情况下，发情周期也会停止。

因此，牛的发情周期虽然不像马、羊及其30赞Z他野生动物那样有明显的季节性，伹还是受季节影响。

发情母牛子宫颈稍大而软，子宫黏膜水肿，子宫角坚实、体积增大，子宫收缩反应比较明显。

不发情的母牛，子宫颈细而硬，子宫较松弛，收缩反应差。

发情母牛卵巢中的卵泡表面突出，圆而光滑，触摸时略有波动。

卵泡直径发育初期约1.5厘米，发育最大时可达2.5厘米。

在排卵前6~12小时，卵泡质地柔软，波动明显。

排卵后，原卵泡处有不光滑的小凹陷，此后将形成黄体。

4.2马和牛直肠检查操作时的注意事项
1.要注意侧身站位，避免在进行检查操作时被马、驴、牛等大型动物踢伤。

2.触诊时先摸到子宫颈的位置，握起来感觉硬而实质，再向前摸到分岔处，顺着子宫角方向，向旁侧、斜下方或斜前方寻找，即可摸到卵巢的位置，用大拇指及中指轻提卵巢，再用食指去感觉其上的滤泡或黄体，一般而言，经产母马、驴、牛由于韧带以及被拉得比较松弛，子宫角没有那么弯曲，因此卵巢的位置会比较深，手臂伸入的位置有时甚至达到整个上臂，反之，若未经产，则其卵巢的位置较浅，手臂深入长度，可能只要深入到手肘的长度就可以摸到卵巢；卵泡摸起来比较软，黄体较硬。

3.要熟悉腹腔和骨盆腔器官、肌肉、筋膜、组织等的正常解剖位置和生理状态。

4.直肠检查取得的效果，在疾病诊断上能起到应有的作用，需在工作中反复练习才能切实掌握。

5.当发现直肠壁有穿孔的可疑时，严禁进行温水灌肠，应尽快确定穿孔性质和部位，采取必要的解救措施。

五、
参考文献
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祝大家周末愉快ovo!!!